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細胞檢測

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胰蛋白酶消化液(不含EDTA,含酚紅)

貨號:G4005

品牌:Servicebio

價格:¥100

規格: 100ml

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  產品簡介:

  胰蛋白酶消化液(Trypsin Solution)含0.25%胰酶(2.5g/L porcine trypsin in Hank's Balanced Salt Solution with phenol red),不含Ca2+和Mg2+。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養細胞的消化,或者一些組織的消化。

  在組織細胞的體外培養和原代細胞培養中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使細胞間的蛋白質(如細胞外基質)水解,使組織或貼壁細胞分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗。胰蛋白酶消化液(Trypsin Solution)含0.25%胰酶,溶于無鈣鎂平衡鹽(HBSS)溶液中,經過濾除菌,可以直接用于培養細胞和組織的消化。

  本產品含酚紅指示劑

  包裝內容:

產品貨號 產品名稱 規格
G4005 胰蛋白酶消化液(不含EDTA,含酚紅) 100ml

  保存條件:

  -20℃保存,有效期12個月。

  使用方法:

  1.貼壁細胞的消化:

  (1)吸去培養液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。

  (2)加入少量胰蛋白酶消化液,蓋過細胞即可,室溫放置至細胞變圓,解離脫落。

  HeLa細胞測試消化效果:將培養至約90%匯合度(90% confluence)的HeLa細胞棄掉培養基,用HBSS或PBS洗2次后,加入適量(能剛好完全浸潤細胞)的0.25%胰酶-無EDTA消化液,室溫條件下消化5-7min,可在顯微鏡下觀察到細胞變圓解離,肉眼下可看到液體中有大量細胞脫落,加入培養基終止消化。

  293T細胞測試:將培養至約90%匯合度(90% confluence)的293T細胞棄掉培養基,用HBSS或PBS洗1次后,加入適量(能剛好完全浸潤細胞)的0.25%胰酶-無EDTA消化液,室溫條件下消化5-7min,可在顯微鏡下觀察到細胞變圓解離,肉眼下可見大量細胞脫落,即可加入培養基終止消化。

  不同的細胞消化時間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。

  (3)顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。

  (4)如果發現消化不足,可加入胰蛋白酶-無EDTA消化液重新消化。

  (5)如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。

  2.組織的消化:不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

  注意事項:

  1.由于組織或細胞性質不同,實驗人員應依據具體情況,確定最佳消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;

  2.本產品不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無菌操作,避免消化液被微生物污染;

  3.不宜4℃長期保存,切忌反復凍融,小量使用時建議分裝凍存;

  4.由于Hank’s balance solution含0.35g/L的NaHCO3,在CO2培養箱中(CO2濃度5%-10%)會迅速變酸,因此37℃消化不宜放入CO2培養箱。

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