賽維爾生物服務、產品資料庫

賽維爾生物

TEL:400-6027-178

賽維爾生物

細胞檢測

  1. 首頁
  2. 全部分類
  3. 產品
  4. 細胞
  5. 細胞檢測
  6. 內容

BrdU 檢測試劑盒

貨號:G4102-50T

品牌:Servicebio

價格:¥1500

規格: 50μl+30ml*4

附件下載地址: ×

  產品簡介:

  BrdU(5-Bromo-2-deoxyUridine),即5-溴脫氧尿嘧啶核苷,是胸腺嘧啶核苷(T)類似物,可以通過競爭替代T摻入DNA合成(S期)。活體注射或細胞培養時加入BrdU,而后利用抗BrdU抗體和抗體連接酶或熒光素作為指示系統,當處于旺盛分裂的細胞摻入BrdU后,即可檢測出含有BrdU的細胞,并以此判斷合成細胞的數目。同時結合其它細胞標記物雙重染色,可判斷出增殖細胞的種類,增殖速度等,對研究細胞動力學有重要意義。BrdU摻入定位準確,陽性結果表達了S期細胞新合成DNA的水平,而且受細胞內外環境影響小,標記不會丟失。本產品適用于各種細胞和組織切片的細胞增殖檢測。

  包裝內容:

產品貨號 產品名稱 規格 保存方式
G4102-1 破膜液 30ml 4℃保存6個月
G4102-2 封閉液3%BSA 30ml 4℃保存6個月
G4102-3 4%多聚甲醛 30ml 常溫保存6個月
G4102-4 1M Hcl 30ml 4℃保存6個月
G4102-5 Anti-BrdU(mouse mAb) 50ul -20℃保存12個月

  注意事項:

  1、本試劑盒試劑如經常使用可按上表的保存方式保存。如長期不用,可放-20℃保存。

  2、BrdU的濃度和處理時間與細胞種類有關。腫瘤細胞需要的濃度和時間都較低,成纖維細胞或上皮細胞等增殖較慢的細胞需要提高濃度并延長作用時間,濃度范圍為20--100 μM,作用時間為40 min -- 4 h,可根據細胞的種類進行調整。

  下表為測試的常用細胞處理濃度及時間,僅供參考。

細胞名稱 Brdu濃度(uM) 孵育時間(min)
A549 40 40
Hela 40 40
NRK-52e 40 40
Skov3 80 120
H9C2 40 40

  3、為保證最佳實驗效果,建議使用本公司生產的其他配套試劑:4%多聚甲醛(G1101);蘇木素染液(G1004);DAPI染液(G1012);二抗;DAB顯色試劑盒(G1211),抗熒光淬滅封片劑(G1401)。

 

  BrdU免疫組化(免疫熒光)操作說明

  一、細胞爬片標本BrdU免疫組化(免疫熒光)操作步驟:

  將蓋玻片用洗潔劑清洗干凈,泡在75%的酒精中靜置10min。然后在酒精燈上將酒精燒干,將燒干的蓋玻片放在六孔板中,待冷卻后將細胞懸液(約1-2×104個細胞)滴加在蓋玻片上。5h后輕輕補加1ml培養基,置37℃5%CO2 培養箱中培養過夜。待細胞貼在玻片上良好生長后每孔避光加入1 ml 含有BrdU的培養基(BrdU的具體濃度見注意事項),于培養箱中孵育40 min后即可。

  1.將上述處理好的細胞爬片用PBS洗3次,加4%的多聚甲醛溶液(G1101)處理30 min。PBS洗3次,每次5min;

  2.滴加破膜液處理10min,PBS洗3次,每次5min;

  3.加蘇木素染液(G1004)室溫染5min,用PBS洗3次,每次5min;(免疫熒光加DAPI染液(G1012)染5min,用PBS洗3次,每次5min。)

  4.爬片滴加4%多聚甲醛處理10min,然后用PBS洗3次,每次5min;

  5.爬片滴加1M Hcl,37℃處理30min,然后用PBS稍洗;

  6.重復步驟4,將切片滴加4%多聚甲醛處理10min,然后用PBS洗3次,每次5min;

  7.將爬片滴加封閉液3%BSA處理30min后稍甩干;

  8.用封閉液3%BSA按1︰100稀釋Anti-BrdU(mouse mAb),配制成一抗工作液,現用現配。

  9.滴加稀釋好的一抗工作液,4℃孵育過夜;

  10.爬片復溫至室溫后沖洗掉一抗工作液,PBS洗3次,每次5min;

  11.在爬片上滴加HRP標記的二抗(建議使用此二抗,可向谷歌公司訂購,貨號:G1210-2-A),室溫孵育1h;(免疫熒光步驟不加HRP標記的二抗,改為滴加用PBS按1︰100稀釋的anti-mouse IgG熒光二抗(可向谷歌公司訂購),室溫避光孵育1h。)

  12.沖洗掉二抗,PBS洗3次,每次5min;(免疫熒光步驟此部分需要避光)

  13.DAB顯色(G1211),脫水,透明,封片,即可在顯微鏡下觀察。(免疫熒光不用DAB顯色,直接加抗熒光淬滅封片劑(G1401)封片,即刻在顯微鏡下觀察。)

  二、BrdU體內標記及石蠟切片免疫組化(免疫熒光)步驟:

  取實驗動物,按照BrdU 50mg/kg的濃度,腹腔注射給藥。共4次,每次間隔2小時,最后一次給藥24小時后,處死動物。

  將組織常規脫水包埋后做石蠟切片后進行免疫組化檢測。

  1.石蠟切片依次經二甲苯和梯度酒精脫蠟至水;

  2.將切片放入盛有抗原修復液的修復盒內進行微波抗原修復,中火至沸后斷電間隔10min,再低火至沸,斷電后自然冷卻至室溫;

  3.加入蘇木素染液(G1004)染5min;(免疫熒光用DAPI染液(G1012)染5min,用PBS洗3次,每次5min;)

  4.將切片放入4%多聚甲醛中10min,然后用PBS洗3次,每次5min;

  5.滴加1M Hcl后,37℃處理30min,用PBS稍洗;

  6.重復4步驟,將切片放入4%多聚甲醛中10min,然后用PBS洗3次,每次5min;

  7.3%雙氧水封閉25min,然后用PBS洗3次,每次5min;(免疫熒光不用此步驟。)

  8.滴加封閉液3%BSA,室溫處理30min后稍甩干;

  9.用封閉液3%BSA按1︰100稀釋Anti-BrdU(mouse mAb),配制成一抗工作液,現用現配。

  10.滴加稀釋好的一抗工作液,4℃孵育過夜

  11.切片復溫至室溫后,沖洗掉一抗工作液,PBS洗3次,每次5min;

  12.在爬片上滴加HRP標記的二抗(建議使用此二抗,可向谷歌公司訂購,貨號:G1210-2-A),室溫孵育1h;(免疫熒光用PBS按1︰300稀釋的anti-mouse IgG熒光二抗(可向谷歌公司訂購),室溫避光孵育1h;)

  13.沖洗掉二抗,PBS洗3次,每次5min;(免疫熒光步驟此部分需要避光)

  14.DAB顯色(G1211),脫水,透明,封片,即可在顯微鏡下觀察。(免疫熒光不用DAB顯色,直接加抗熒光淬滅封片劑(G1401)封片,即刻在顯微鏡下觀察。)

幸运飞艇投注技巧图 小仓柚子下马番号 一分快3是国家的吗 秒秒彩长期盈利心得 点点策略 上海11选5跨度012路 富贵乐园棋牌游戏下载大全 p3东北王独胆图 天天红包是不是真的 西瓜配资 贵州省快3开奖计划 20选5风采网走势 乐彩网江苏快三 排列五500期基本走势图 捷报比分篮球捷报比分篮球 康美药业股票行情 龙江棋牌微乐大庆麻将2016版